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    牛口蹄疫抗原(FMD)Elisa試劑盒說明書

    發(fā)布時間: 2010/10/18  點擊次數(shù): 1000次
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    牛口蹄疫抗原(FMD)Elisa試劑盒僅供研究使用。
    檢測范圍:                                                          96T
    10ng/L - 240ng/L
     
    使用目的:
    本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關液體樣本中口蹄疫抗原(FMD)含量。
    實驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛口蹄疫抗原(FMD)水平。用純化的牛口蹄疫(FMD)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入口蹄疫抗原(FMD),再與HRP標記的口蹄疫(FMD)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的口蹄疫抗原(FMD)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中牛口蹄疫抗原(FMD)濃度。
    試劑盒組成

    1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
    2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(480ng/L) 0.5ml×1瓶
    3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
    4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
    5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
    6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個


    標本要求
    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步驟
    1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

    240ng/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
    120ng/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
    60ng/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
    30ng/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
    15ng/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

    ELISA試劑盒


     
     
    2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
    4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
    5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
    6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
    7.         溫育:操作同3。
    8.         洗滌:操作同5。
    9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
    10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
    11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
    操作程序總結:
     

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